dynamický BIOSENSORS heliX cyto plne automatizovaný laboratórny analytický systém

Špecifikácie

• Názov produktu: heliX cyto
• Výrobca: Dynamic Biosensors GmbH
• Verzia: 1.0

Informácie o produkte

• Systém heliX cyto je určený pre interakčnú cytometriu jednotlivých buniek (scIC) na meranie väzbovej kinetiky fluorescenčne značených molekúl na ciele na bunkovom povrchu s časovo rozlíšeným spôsobom.

Návod na použitie produktu

Používanie čipu heliXcyto

• Čip heliXcyto obsahuje jeden mikrofluidný kanál s elektródovými bodmi na zachytávanie a meranie buniek. Zabezpečte správne umiestnenie čipu a postupujte podľa pokynov na zachytávanie buniek.

Údržbový čip

• Údržbový čip používajte iba na čistenie, testovanie a údržbu. Nepoužívajte ho na experimenty, aby ste predišli kontaminácii.

Bežiaci vyrovnávacia pamäť

• Počas meraní používajte bežiaci pufor 1 (RB 1). Podrobné informácie nájdete v hárku kompatibility scIC v hlavnom návode.

Analýza senzorgramu

• Počas meraní monitorujte senzorgram v reálnom čase v softvéri heliOS. Analyzujte fluorescenčnú odozvu v priebehu času, aby ste získali kinetické rýchlosti.

Pasivácia

• Zvážte použitie pasivácie ako voliteľného kroku na zabránenie adsorpcie analytu inkubáciou pasivačného činidla na čipe.

Normalizácia

• Normalizácia je proces štandardizácie údajov na porovnanie a analýzu. Dodržujte normalizačné postupy podľa používateľskej príručky.

ÚVOD

• Táto príručka slúži ako skrátený prehľadview systému heliXcyto a jeho možností. Všetky kapitoly sú podrobnejšie rozobraté v hlavnom sprievodcovi heliXcyto, ktorý nájdete na adrese https://www.dynamic-biosensors.com/helios-download-latest/

Terminológia heliXcyto interakcia jednotlivých buniek cytometria

• Interakčná cytometria jednotlivých buniek (scIC) je technológia, ktorá meria kinetiku väzby fluorescenčne značenej molekuly (analytu) na cieľ (ligand) na povrchu bunky zaznamenávaním fluorescenčného signálu s časovo rozlíšeným spôsobom.

Analyt

• Analyt je fluorescenčne značená molekula v mobilnej fáze, ktorá sa dokáže viazať na cieľ na povrchu bunky.

Ligand

• „Ligand“ je názov používaný v softvéri heliOS na opis cieľa na povrchu bunky, na ktorý sa analyt môže viazať. Môže to byť molekula receptora, lipid, cukor alebo iná molekula na povrchu bunky.

Bunková pasca

• Bunkové lapače sú priepustné, biokompatibilné polymérové ​​klietky na čipe heliXcyto. Sú navrhnuté tak, aby zachytávali a imobilizovali bunky rôznych veľkostí od približne 6 do 25 µm v prietokovom kanáli. Bunkové lapače sú dostupné v 3 rôznych veľkostiach: malá, stredná a veľká.

Čip heliXcyto

• Čipy heliXcyto obsahujú jeden mikrofluidný kanál s otvormi na každej strane. V strede kanála sa nachádzajú dve zlaté elektródové škvrny.
• Jedno miesto slúži ako referenčné miesto a druhé miesto nesie 3D biokompatibilné polymérne klietky na zachytávanie buniek a slúži ako meracie miesto. Meracie miesto môže obsahovať 1 alebo 5 pascí rovnakého typu.
• Referenčný bod umožňuje referenciu zozbieraného fluorescenčného signálu v reálnom čase. Čip heliXcyto je opakovane použiteľný a jednorazový.

Údržbový čip

• Údržbový čip je jednokanálový mikrofluidný čip používaný na všetky čistiace, testovacie a údržbárske operácie.
• Medzi tieto operácie patrí rutina Čistenie a uspávanie, rutina Prebudenie a naplnenie, premytie systému a fluidný test. Tento čip by sa nemal používať na skutočné experimenty s bunkovými/proteínovými roztokmi, aby sa predišlo ďalšej kontaminácii čipu.

Bežiaci vyrovnávacia pamäť

• Bežiaci pufor je pufor používaný v heliXcyto počas merania. Vo všeobecnosti sa odporúča použitie bežiaceho pufra 1 (RB 1).
• Viac informácií nájdete v hárku kompatibility scIC, ktorý nájdete v hlavnej príručke.

Senzorogram

• Senzorgram scIC je graf fluorescenčnej odozvy v počtoch za sekundu (cps) v priebehu času, ktorý ilustruje priebeh interakcie na bunkách alebo v bunkách. Táto krivka môže byť viewv reálnom čase v systéme HeliOS počas merania.
• Pri analýze senzogramov sa určí exponenciálna krivka, ktorá najlepšie zodpovedá pozorovaným fluorescenčným stopám, a extrahujú sa kinetické rýchlosti (kon, koff).

Pasivácia

• Pasivácia je voliteľný krok v priebehu testu, pri ktorom sa na čip vstrekne pasivačné činidlo a inkubuje sa, aby sa zablokovali povrchy. To môže pomôcť zabrániť adsorpcii analytov na materiály čipu.

Normalizácia

• Na zohľadnenie miernych rozdielov v signáloch v dôsledku zberu signálu z každého meracieho bodu samostatným detektorom sa používa normalizačný krok. Na začiatku testu sa vstrekne fluorescenčné farbivo s definovanou koncentráciou (na základe najvyššej koncentrácie analytu a stupňa značenia analytu). Tento normalizačný krok sa automaticky zahrnie do metódy merania a nameraný normalizačný pík sa použije na automatickú korekciu rozdielov medzi detektormi počas analýzy údajov pred porovnávaním v reálnom čase.

Princípy merania scIC

Aplikácie scIC

• Interakčná cytometria jednotlivých buniek (scIC) meria kinetické rýchlosti a afinitu fluorescenčne značeného analytu, ktorý sa viaže na cieľ a uvoľňuje z cieľa priamo na živých bunkách.
• Detekcia analytov v scIC je nezávislá od veľkosti, a preto je relevantná pre akúkoľvek molekulu od sub-nm do > 100 nm a relevantná pre všetky triedy molekúl od malých molekúl, peptidov, aptamérov, nanotelisiek, afitelisiek, protilátok, bispecifických formátov protilátok, proteínov, proteínových komplexov až po vezikuly (exozómy), lipidové nanočastice a vírusy.

Technológia scIC sa môže zamerať na nasledujúce oblasti použitia:

• meranie signálu amplitúdy vo väzbových obrazovkách
• kinetická analýza rýchlostí kon a koff
• hodnotenie afinity a avidity pomocou koffových a bifázických modelov prispôsobenia
• testy špecifickosti
• relatívna kvantifikácia membránových proteínov na povrchu bunky
• štúdie epitopového binningu a kompeticie
• inhibičné testy
• posúdenie internalizácie cieľových proteínov

Hardvérové ​​možnosti heliXcyto

Fluidný systém

• Fluidný systém heliXcyto je napájaný až 3 rôznymi fľašami s pufrom, čo umožňuje variácie v prevádzkovom a udržiavacom pufri. Čerpadlá v heliXcyto je možné nastaviť na prietoky medzi 20 a 500 µl/min, ktoré vyhovujú rôznym potrebám.amppožiadavky na le a testovanie. Prietokový kanál čipu sa pripája k fluidnému systému cez dva otvory. Otvor na ľavej strane je pripojený k sample, pufrovacie a premývacie potrubia, zatiaľ čo otvor na pravej strane je prepojený s regeneračným potrubím.
• Tento obojsmerný fluidný systém umožňuje stabilné zachytávanie buniek počas rôznych krokov merania a prípadne regeneráciu čipu pre jeho opätovné použitie počas testu.
• Obrázok 1. Integrácia čipu vo fluidnom systéme

Optický systém

• Fluorescenčný signál je excitovaný červenými a zelenými diódami emitujúcimi svetlo (LED) a detekovaný štyrmi jednofotónovými počítačmi, ktoré zhromažďujú červené a zelené signály z každého bodu v celej hĺbke kanála.
• Dva nezávislé signály je možné monitorovať súčasne na tom istom meracom mieste, čo umožňuje merať dve interakcie naraz v dvojfarebnom nastavení testu.
• Obrázok 2. Nastavenie optiky
• Zber signálu z každého meracieho bodu je zabezpečený samostatným detektorom, čo môže viesť k miernym rozdielom v nespracovaných počtoch. Aby sa to zohľadnilo, do testov generujúcich údaje je automaticky zahrnutý krok normalizácie.
• Okrem jednofotónových počítačov je prístroj vybavený CCD kamerou a mikroskopom s odrazeným svetlom. Tieto nástroje umožňujú zobrazovanie buniek v reálnom čase, čo umožňuje posúdiť integritu buniek a kvalitu analytu počas celého merania.
• Toto kombinované nastavenie zabezpečuje sledovanie interakcií aj biologických podmienok, čo poskytuje komplexné vyhodnotenie experimentu.

pracovný postup scIC

Proces merania scIC možno rozdeliť do 3 kľúčových krokov

1. Experimentálny návrh v heliOS: Každé meranie začína návrhom experimentu v softvéri heliOS. Pracovný postup testu sa nastavuje výberom preddefinovaných metód a úpravou experimentálnych parametrov, ako je použitá bunková línia, koncentrácia analytu a podmienky pufrovania. heliOS automaticky vypočíta presné množstvá buniek, analytov, pufrov a ďalších roztokov potrebných na meranie, čím zefektívňuje proces prípravy.
2. Príprava pufrov, analytov a buniek: Po dokončení experimentálneho návrhu sa potrebné materiály pripravia podľa špecifikácií poskytnutých systémom heliOS. Pufre, analyty a bunky sa automaticky vložia do prístroja.ampler.
3. Meranie a analýza údajov: Systém vykonáva plánovanú sériu automatizovaných meraní interakcií v reálnom čase, ktoré nevyžadujú žiadny ďalší zásah zo strany používateľa. Dáta je možné analyzovať počas merania, aby ste získali okamžitý prehľad o výsledkoch.

scIC testy v heliOS

Okrem testov generujúcich údaje softvér poskytuje aj metódy na testovanie čipov, čistenie a údržbu prístrojov.

Tabuľka 1. Overené testy generujúce údaje

Kinetika scIC	Meria plnú kinetiku na bunkách s nastaviteľnou asociáciou analytu medzi 1 a 5 koncentráciami, po ktorej nasleduje jediná disociácia po najvyššej koncentrácii. Zelený alebo červený kanál. Obsahuje možnosť testu iba analytu.
scIC Kinetics – dvojfarebné	Meria plnú kinetiku na bunkách s nastaviteľnou asociáciou analytu medzi 1 a 5 koncentráciami, po ktorej nasleduje jediná disociácia po najvyššej koncentrácii. Zelený aj červený kanál sú zapnuté súčasne. Obsahuje možnosť testu iba analytu.
Disociácia scIC – dvojfarebná	Meria disociáciu analytu z buniek, ktoré boli predinkubované s fluorescenčne značeným analytom so zeleným a/alebo červeným kanálom.

Prípravy a vývoj testov na meranie scIC

Pred nastavením merania scIC je potrebné zvážiť niekoľko bodov

• Koncentrácia analytu, stupeň značenia, vlastnosti a kvalita.
• Normalizačný roztok a budiaci výkon.
• Kvalita a manipulácia s bunkami.

Koncentrácia analytu a stupeň značenia

• Podľa štandardných postupov kinetických meraní odporúčame zvoliť rozsah molárnej koncentrácie analytu od 0.1x do 10x očakávanej rovnovážnej disociačnej konštanty (Kd) pre kinetiku s viacerými koncentráciami. Pre kinetiku s jednou koncentráciou alebo disociačné merania by sa koncentrácia analytu mala pohybovať medzi 1x a 10x očakávanej Kd. Požadovaný objem analytu vypočítaný pre 10-minútový čas asociácie pri prietoku 25 µl/min predstavuje celkovo približne 300 µl.
• Stupeň značenia (DOL) analytu by mal byť ideálne 1, hoci hodnoty DOL 2 alebo 3 sú stále prijateľné. Majte však na pamäti, že vyšší počet značiek na analyte môže ovplyvniť jeho väzbové vlastnosti a môže zvýšiť pravdepodobnosť agregácie alebo nešpecifickej väzby. Na dosiahnutie optimálneho DOL postupujte podľa protokolu dodaného so značkovacími súpravami obsahujúcimi červené alebo zelené farbivo z radu činidiel heliXcyto.
  Normalizácia
• Normalizácia je prvým krokom vo všetkých metódach generovania údajov. Kompenzuje mierne odchýlky signálu spôsobené použitím samostatných detektorov pre každé meracie miesto. V tomto kroku sa na začiatku testu vstrekne fluorescenčné farbivo v užívateľom definovanej koncentrácii.
• Koncentrácia normalizačného roztoku sa vypočíta vynásobením najvyššej koncentrácie fluorescenčne značeného analytu použitého pri meraní stupňom značenia (DOL) analytu. Táto koncentrácia riadi excitačný výkon LED diódy aplikovaný počas merania. Cieľom je, aby vrchol normalizačného roztoku dosiahol približne rovnaký fluorescenčný signál. amplitude ako najvyššia koncentrácia analytu.
• Pozrite si tabuľku koncentrácií normalizačného roztoku v hlavnom sprievodcovi a nastavte počiatočné hodnoty. Upozorňujeme, že tabuľka slúži na nastavenie počiatočných hodnôt, ale excitačný výkon LED diód je možné počas vývoja testu ďalej upraviť.

Kvalita a príprava buniek

• Životaschopnosť buniek by mala byť nad 95 % a bunky by mali byť vo všeobecnosti v dobrom stave. V prípade adherentných buniek odporúčame pracovať s bunkami, ktoré sú na 50 – 70 % konfluentné.
• V prípade suspenzných buniek odporúčame zber v strednej logaritmickej fáze rastu. Na jeden cyklus je potrebných 50 µl bunkovej suspenzie s koncentráciou 1E+06 buniek/ml.

Zber suspenzných buniek

1. Centrifugujte približne 2E+06 buniek pri 300 g počas 7 minút, aby ste odstránili kultivačné médium. Supernatant zlikvidujte.
2. Bunky raz premyte resuspendovaním bunkovej pelety v približne 1 ml DPBS. Suspenziu centrifugujte pri 400 g počas 5 minút, aby sa peletovali živé bunky. Supernatant opatrne zlikvidujte, aby ste odstránili fragmenty a médium.
3. Jemne resuspendujte v 1 ml DPBS, preneste suspenziu na vrch bunkového sitka a preceďte ju samospádom.
4. Zmerajte koncentráciu buniek v precedenej suspenzii a upravte na 1E+06 buniek/ml.
   • TIP: Niektoré suspenzné bunky majú tendenciu tvoriť zhluky. Zhluky jemne resuspendujte a pred prvým krokom centrifugácie ich preceďte.
   • Pri manipulácii s bunkovými suspenziami používajte pipetovacie hroty so širokým priemerom, aby ste predišli vysokým šmykovým silám počas prenosu alebo resuspendovania.

Zber adherentných buniek

1. Bunky umyte sterilným DPBS.
2. Bunky disociujte z kultivačnej banky pomocou vami preferovaného disociačného činidla (napr. TrypLE).
3. Disociované bunky resuspendujte v požadovanom objeme média a prefiltrujte cez 30 nm bunkové sitko.
4. V prípade silne adherentných buniek voliteľne pridajte EDTA (konečná koncentrácia 5 mM).
5. Bunky centrifugujte pri 300 g počas 7 minút, aby sa odstránilo kultivačné médium. Supernatant zlikvidujte.
6. Bunky resuspendujte v 1 ml DPBS.
7. Zmerajte koncentráciu buniek a upravte na 1E+06 buniek/ml.
   • TIP: Na pridanie živín do buniek sa môže použiť bunkové médiá zriedené s DPBS v pomere 1:4.ampv prípade citlivých buniek alebo dlhého pracovného postupu testu.

Fixácia buniek

1. Centrifugujte pri 300 g počas 7 minút až do dosiahnutia počtu 10E+06 buniek, aby ste odstránili kultivačné médium. Supernatant zlikvidujte.
2. Bunkový pelet resuspendujte v 1 ml PBS, centrifugujte a supernatant zlikvidujte.
3. Resuspendujte bunkový pelet v 500 µl PBS/2% PFA (62.5 µl 16% roztoku PFA + 437.5 µl PBS).
4. Bunky inkubujte pri izbovej teplote 10 minút (za občasného jemného trasenia).
5. Pridajte 500 µl PBS a suspenziu centrifugujte pri 400 g počas 5 minút, aby sa odstránila PFA.
6. Zlikvidujte supernatant.
7. Bunky resuspendujte v 1 ml PBS, prefiltrujte cez 30 µm bunkové sitko, centrifugujte (400 g, 5 min) a supernatant zlikvidujte.
8. Bunky resuspendujte v približne 1 ml PBS (voliteľné: upravte na konečnú koncentráciu 5E+06 buniek/ml).
9. Fixované bunky skladujte pri teplote 2 – 8 °C, spotrebujte do jedného mesiaca.
   • Ak je potrebné opraviť viac buniek, zväčšite všetky množstvá zodpovedajúcim spôsobom.
   • POZNÁMKA: Rýchlosť centrifugácie počas zberu buniek sa môže upraviť podľa typu buniek, ak sú bunky citlivé a bežne sa používajú nižšie g-sily.
   • Koncentrácia PFA sa môže pohybovať medzi 0.5 a 4 %.

Nastavenie testu scIC

Nasledujúce testy scIC by mali byť zahrnuté do vývoja testov a môžu byť neskôr zopakované v rámci pracovných postupov testov.

Pracovný postup vývoja testu je rozdelený do 3 odlišných po sebe nasledujúcich krokov:

1. Test cyto čipu
2. Test iba analytu
3. Kinetický test

Test cytochipom

• Pred použitím cyto čipu pri meraní je potrebné vyhodnotiť kvalitu nového čipu. Začnite samostatným vykonaním testu cyto čipu. Informácie o nastavení a vyhodnotení testu čipu nájdete v kapitole o cyto čipe Helix v hlavnej príručke.

Test iba analytu

• Vývoj scIC testu začína testom iba s analytom, ktorý hodnotí správanie fluorescenčne značených analytov na čerstvom povrchu čipu bez buniek.
• Tento test sa môže tiež pravidelne opakovať na posúdenie stability značených analytov. Test scIC Analyte Only Test je možné nakonfigurovať v kinetických testoch začiarknutím políčka Analyte Only v časti Cell settings.
• Na posúdenie kvality analytu postačuje najvyššia použitá koncentrácia a možno ju nakonfigurovať vypnutím všetkých asociácií v teste okrem jednej.

Nastavenie pracovného postupu kinetického testu

• Kinetický test sa zvyčajne používa v rámci automatizovaného pracovného postupu, ktorý obsahuje testy generujúce údaje, ako aj prvky údržby. Keď analyt prejde testom kontroly kvality iba analytu, môže sa použiť na meranie na bunkách.
• Pre spoľahlivú kvantifikáciu kinetických rýchlostí by mala byť signálna odozva počas asociácie závislá od koncentrácie a mala by sa zvyšovať s vyššími koncentráciami analytu.
• Najvyššia koncentrácia by mala dosiahnuť plató, čo naznačuje, že sa dosiahol ustálený stav väzby. Disociácia musí trvať dostatočne dlho, aby sa uvoľnila významná časť viazaného analytu (viac ako 5 %), a umožnilo sa spoľahlivé prispôsobenie krivky.
• Ako východiskový bod použite predvolené parametre v podmienkach testu a ďalej ich upravte v závislosti od výsledkov.

Examp1. Odporúčaný pracovný postup testu

Pracovný postup testu umožňuje používateľom zaradiť metódy merania a údržby do frontu na základe ich špecifických experimentálnych potrieb.

Pracovný postup testu môže zahŕňať nasledujúce kroky v uvedenom poradí:

1. Prime (údržbový čip)
2. Kinetika scIC (bunky A, analyt A, cytochip)
3. Umývanie systému (údržbový čip)
4. Kinetika scIC (bunky B, analyt A, cytochip)
5. Umývanie systému (údržbový čip)
6. Kinetika scIC konfigurovaná iba pre analyt (analyt A, cytochip)
   • Kroky na naplnenie a premytie systému sa vykonávajú na údržbovom čipe. Premytie systému sa vykonáva pri prechode na inú bunkovú líniu a pred vykonaním testu iba analytu na konci pracovného postupu.
   • Viac informácií nájdete v časti o premývaní systému Cyto v hlavnom návode.
   • Pri zaraďovaní kinetických testov na bunkách do fronty zohľadnite životaschopnosť buniek, ktorá závisí od bunkovej línie.
   • V prípade citlivých bunkových línií sa odporúča spustiť iba 1 – 2 testy v rámci jedného pracovného postupu. V prípade odolnejších bunkových línií je možné zaradiť ďalšie testy do frontu.
   • POZNÁMKA: Pre ďalšie testy pripravte bunkový roztok v samostatných fľaštičkách tak, že bunky pomenujete odlišne.
   • Uistite sa, že všetky činidlá sú čerstvé a prefiltrované cez 0.22 µm filter. Nakoniec vložte pripravené činidlá do prístroja podľa pokynov systému heliOS.
   • Beh je možné spustiť kliknutím na modrú šípku „Spustiť“ a vykonaním krokov v Sprievodcovi spustením testu.
   • Po spustení cyklu zariadenie pracuje nezávisle, kým sa nedokončí celý pracovný postup testu.

Analýza experimentov scIC

Pracovný postup analýzy scIC

• Dáta scIC sa môžu líšiť od štandardných dát biosenzorov kvôli prirodzenej komplexnosti udalostí, ktoré sa vyskytujú na bunkách zachytených na povrchu čipu heliXcyto, čo môže viesť k nepravidelnostiam senzorgramu.
• Preto sa kladie dôraz na kontrolu kvality snímok zachytených v každom kroku merania a generovaných senzorgramov na vstupnej stránke automatizovanej analýzy.
• Okrem toho heliOS poskytuje nástroje na riešenie nezrovnalostí v senzorgramoch počas manuálnej analýzy údajov scIC.

Proces analýzy údajov scIC:

1. Kontrola obrazu:
   • Skontrolujte všetky snímky zachytené počas merania (karta Snímky v okne experimentu).
   • Koľko buniek zostalo stabilne v pasciach počas celého merania?
   • V akom stave sú bunky? Skontrolujte granularitu a integritu buniek.
   • Sú pasce po regenerácii čisté?
2. Kontrola surových údajov:
   • Preskúmajte nespracované údaje pre referenčný bod 1 a merací bod 2
   • Signál normalizačného píku by mal byť blízky alebo vyšší ako najvyšší signál surových dát.
   • Vracia sa signál na základnú úroveň na oboch miestach, alebo existujú dôkazy o nešpecifickej väzbe?
3. Kontrola normalizovaných údajov:
   • Prekrývajú sa skoky vstrekovania pre bod 1 a bod 2 správne?
4. Kontrola referenčných údajov:
   • Vráti krok regenerácie signál späť na základnú hodnotu? Ak nie, skontrolujte, či sa v pasciach po regenerácii nachádzajú bunky alebo nečistoty.viewobrázky.
   • Sú v referenčných krivkách hroty, odľahlé hodnoty alebo iné nepravidelnosti? Ak áno, znova...view obrázky s cieľom identifikovať možné príčiny a zvážiť manuálne úpravy.
5. Kontrola zhody údajov:
   • Vykonanie vizuálneho posúdenia kvality
   • Opisuje fitovanie presne správanie kriviek, alebo fitovacia čiara pretína senzorogram?
   • Opisuje fitovanie zakrivenie dát vhodne?
   • Je ampJe poloha v súlade s uvedenými údajmi?

Automatizovaná analýza dát scIC

• Automatizovaná analýza scIC spracováva surové dáta do grafov kontroly kvality a fitovaných dát len ​​niekoľkými kliknutiami.
  1. Otvorte experiment scIC dvojitým kliknutím na vybraný experiment v zozname experimentov
  2. Kliknite na veľké modré tlačidlo Analyzovať v dolnej časti karty experimentu.
  3. V pracovnom postupe experimentu vyberte test, ktorý chcete analyzovať.
  4. Z dostupných typov analýzy vyberte Kinetics scIC a kliknite na tlačidlo Ďalej.
     • POZNÁMKA: Ak experiment stále prebieha, v zozname sa zobrazia iba dokončené testy. Po výbere testu sa v ďalšom okne zobrazia všetky dostupné typy analýz špecifické pre použitú metódu/test.
  5. V prípade potreby nakonfigurujte analýzu v nasledujúcom okne. Predvolený model prispôsobenia je „Kinetika – úroveň voľného konca“ s aktivovaným začiarkavacím políčkom „Vynútiť prispôsobenie úrovne konca na nulu“. Od tohto modelu sa odchyľujte iba v prípade, ak biológia alebo údaje vyžadujú komplexnejší popis.
  6. Po dokončení konfigurácie kliknite na tlačidlo Analyzovať a zobrazte všetky odvodené snímky, nespracované a spracované senzorgramy a kinetické hodnoty.
• Vzhľadom na inherentnú zložitosťampV prípade testov scIC môžu mať výsledné senzorgramy nepravidelnosti.
• Aby sa tento problém vyriešil, v automatizovanej analýze sa kladie dôraz na kontrolu kvality snímok a senzorgramov.
• Ak sú potrebné manuálne korekcie alebo hlbšia analýza, nástroje na korekciu artefaktov sú k dispozícii v časti manuálnej analýzy Scratchpad.

Údržba a dekontaminácia heliXcyto

• Údržba systému heliXcyto je nevyhnutná na zabezpečenie optimálneho výkonu a dlhej životnosti prístroja. Pravidelná údržba zahŕňa čistiace postupy, ktoré zabraňujú kontaminácii a udržiavajú integritu systému, čo umožňuje presné výsledky a bezproblémovú prevádzku. Dôsledná starostlivosť je kľúčová pre spoľahlivosť prístroja a kvalitu experimentálnych výsledkov.
  Údržba systému heliXcyto zahŕňa dva kľúčové postupy: premývanie systému Cyto System Wash, ktoré je možné integrovať priamo do pracovného postupu testu, a čistenie a spánok, ktoré sa vykonáva ako samostatná rutina na údržbu prístroja tesne pred použitím po predchádzajúcom dlhšom meraní cez noc alebo ak sa nepoužíva dlhšie ako 2 dni.
• Funkcie System Wash aj Clean & Sleep vyžadujú prítomnosť údržbového čipu heliX® v zásobníku na triesky.

Rutina upratovania a spánku

• Rutina Clean & Sleep je určená na čistenie a vypnutie/uskladnenie zariadenia. Metóda prepláchne fluidné trubice zariadenia heliX® najprv ultračistou vodou a potom 70 % etanolom. Nakoniec sa všetky trubice odvzdušnia.
• Tento čistiaci postup je plne automatizovaný a trvá približne 40 minút. Počas postupu sa etanol vstrekuje do fľaše s vodou, takže obsah fľaše by sa mal následne zlikvidovať.
• Po čistení a spánku prístroj prejde do režimu spánku a nemožno ho používať, kým sa nevykoná prebudenie a naplnenie. Pre oba chody je potrebný údržbový čip heliX®.
• DÔLEŽITÉ: Aby ste predišli kontaminácii skúmavky, po čistení nezabudnite zlikvidovať obsah fľaše s vodou (zmes vody a etanolu) a vyprázdniť nádobu na odpad.

Vypnutie a dlhodobé skladovanie

• V prípade dlhších období nepoužívania po procedúre Clean & Sleep vyberte fľašu s vodou a etanolom z pufrovacej misky a nechajte hadičku vystavenú vzduchu.
• Taktiež vyberte údržbový čip heliX® a uložte ho do pôvodného vrecka. Zabránite tak spätnému toku a kontaminácii. Vypnite zariadenie.

Cytosystémové premytie

• Premývací roztok heliXcyto System dôkladne čistí mikrofluidický systém pomocou čistiaceho roztoku 3 (CS3) v priebehu približne 45 minút. CS3 sa zachytáva v dvoch sekundách.tages. Prvá ihla a sampSlučka sa naplní a inkubuje, aby sa odstránili všetky kontaminanty.
• POZNÁMKA: Spustite premývanie systému Cyto System Wash aspoň raz denne, keď sa zariadenie používa. Odporúčame pridať metódu premývania systému Cyto System do pracovného postupu testu buď po každom teste (pri prechode na novú bunkovú líniu alebo akamp(kvalita je suboptimálna) alebo na konci pracovného postupu testu. Vymeňte údržbový čip po maximálne 50 premytiach systému Cyto, čo je zobrazené ako počet regenerácií v zásobníku čipov. view ovládania zariadenia.

Kontaktovať

• Dynamic Biosensors GmbH
• Perchtinger Str. 8/10
• 81379 Mníchov
• Nemecko
• Bruker Scientific LLC
• 40 Manning Road, Manning Park
• Billerica, MA 01821

USA

• Informácie o objednávke order.biosensors@bruker.com
• Technická podpora support.dbs@bruker.com
• www.dynamic-biosensors.com
• Nástroje a čipy sú navrhnuté a vyrobené v Nemecku.
• ©2025 Dynamic Biosensors GmbH
• Len na výskumné použitie. Nepoužívať pri klinických diagnostických postupoch.

FAQ

Často kladené otázky o scIC

Môžem čip heliXcyto znova použiť?

Áno, čip heliXcyto je opakovane použiteľný aj jednorazový. Dodržiavajte správne pokyny na čistenie a skladovanie.

Aký je účel údržbového čipu?

Čip údržby sa používa na čistenie, testovanie a údržbu, aby sa zabezpečilo správne fungovanie systému.

Ako často mám čistiť zariadenie?

Fluidický systém heliXcyto sa udržiava v čistote pomocou metód Cyto System Wash a Clean&Sleep. Mikrofluidický systém sa odporúča čistiť pomocou Cyto System Wash na údržbovom čipe po každom teste (najmä pri zmene typu buniek) alebo najneskôr na konci pracovného postupu testu. Procedúra Clean&Sleep sa má aplikovať tesne pred použitím po predchádzajúcom dlhom meraní (napr. ráno po nočnom experimente) alebo keď sa heliXcyto nebude používať dlhšie ako 2 dni po odstavení.

Ako dlho je možné roztoky: RB 1 / voda / CS 1 / CS 3 / normalizačný roztok skladovať v zariadení?

Vo všeobecnosti sa pred každým meraním musia všetky roztoky skontrolovať na zostávajúci objem a na prípadný zákal alebo zrazeninu. V takom prípade je potrebné roztok okamžite vymeniť. Voda a RB 1 sa musia denne vymieňať a RB 1 sa musí pred každým meraním prefiltrovať. Zriedený normalizačný roztok sa môže používať 2 dni po sebe. Čistiace roztoky sú stabilné približne 3 dni.

Ako dlho môžem používať čip heliXcyto?

Dátum exspirácie čipu heliXcyto je možné skontrolovať na karte Zásobník čipov v sekcii Zariadenie v systéme heliOS. Po dátume exspirácie nie je možné zaručiť integritu čipu. Napriek tomu, pokiaľ pasce zostanú stabilné, povrch je čistý a fluorescenčné pozadie je pod hraničnou hodnotou uvedenou v teste čipu, čip sa považuje za použiteľný na merania. Po použití čipu sa odporúča pravidelné vonkajšie čistenie čipu (súprava na čistenie čipov CCK-1-1), aby sa výrazne predĺžila jeho životnosť.

Ako dlho môžem používať údržbový čip?

Čip údržby je potrebné vymeniť po 50 premytiach systému (počítané ako regenerácie na karte Zásobník čipov v ovládacom prvku Zariadenie v systéme heliOS).

Ako často by sa mal vykonávať test s čipom heliXcyto?

Test čipu zhromažďuje informácie o fluorescenčnom pozadí, čistote a integrite čipu pred začatím nového experimentu. Vykoná sa aspoň raz pri použití nového čipu, ale odporúča sa vykonať ho pred alebo na začiatku každého experimentu, aby sa skontroloval stav čipu. To umožňuje upraviť podmienky merania a vysledovať abnormality v senzorgramoch až k čipu alebo zariadeniu.

Aká je chemická štruktúra značenia analytov?

Červené alebo zelené fluorescenčné farbivo sa pomocou našich značkovacích súprav viaže cez NHS-estery na primárne amíny v proteínových analytoch (napr. lyzíny alebo N-terminálny koniec). Podrobnosti a časť o riešení problémov nájdete v našich návodoch k súprave na značenie heliXcyto s červeným farbivom (súprava na značenie s červeným farbivom 2 CY-LK-R2-1) a súprave na značenie heliXcyto so zeleným farbivom (súprava na značenie so zeleným farbivom CY-LK-G1-1) od našich... webobchod.

Kde nájdem prihlasovacie údaje a informácie o licencii pre systém heliOS?

Proces zadávania prihlasovacích údajov a licenčných informácií je popísaný v časti Inštalácia heliOS v sprievodcovi heliXcyto od nášho webstránka (sprievodca heliXcyto). Informácie o vašej licencii by mali byť uložené v priečinku scIC na pracovnej ploche heliXcyto PC, ktorý náš aplikačný špecialista vytvoril počas školenia.

Aké sú rozsahy excitácie/emisie heliXcyto?

Excitácia v červenej farbe je 605-625 nm, emisia (detekcia) je 655-685 nm. Excitácia v zelenej farbe 490-510 nm, emisia v zelenej farbe je 525-575 nm.

Koľkokrát musím zmerať ten istý experiment, aby som dosiahol štatistickú spoľahlivosť?

Na dosiahnutie spoľahlivých priemerných kinetických rýchlostí sa odporúča vykonať 3 – 4 opakovania meraní kinetiky s 3 koncentráciami v homogénnej bunkovej populácii. V konzistentnom súbore údajov by sa asociačné a disociačné rýchlosti replikátov mali pohybovať v 2 – 4-násobnom okne.

Aká je citlivosť meraní scIC?

Dolný detekčný limit z hľadiska expresie cieľa závisí od značenia analytu, ale scIC zvyčajne dokáže merať kinetiku už pri 1 000 – 10 000 molekulách na bunku. Pre zvýšenie citlivosti sa odporúča zachytiť aspoň 5 buniek a hustota analytu 5 – 10 a výkon LED diódy musia byť vyvážené, aby sa dosiahol maximálny počet fluorescencií.

Aké sú detekčné limity heliXcyto z hľadiska kinetických rýchlostí?

Najaktuálnejšie technické limity nájdete v technických špecifikáciách heliXcyto, ktoré nájdete v sprievodcovi heliXcyto (sprievodca heliXcyto). Disociačná konštanta Kd: 10 pM až 1 mM Asociačná rýchlostná konštanta kon: 1E3 až 1E7 M⁻¹ s⁻¹ Disociačná rýchlostná konštanta koff: 1E⁻6 až 1 s⁻¹ Podrobné informácie nájdete v našom sprievodcovi heliXcyto od nášho... webstránky.

Dokumenty / zdroje

dynamický BIOSENSORS heliX cyto plne automatizovaný laboratórny analytický systém [pdfPoužívateľská príručka Plne automatizovaný laboratórny analytický systém heliX cyto, heliX cyto, plne automatizovaný laboratórny analytický systém, automatizovaný laboratórny analytický systém, laboratórny analytický systém, analytický systém, systém

Referencie

• Používateľská príručka