Dynamická súprava BIOSENSORS heliX plus Reduceing Agent Kit 1

Kľúčové vlastnosti

• Umožňuje redukciu disulfidových väzieb pomocou TCEP.
• Kompatibilné s proteínmi a protilátkami (MW > 20 kDa).
• Miestovo špecifické zníženie protilátok.
• Okamžitá väzba redukovaných molekúl je možná (pozri používateľskú príručku HK-MAL).
• Redukcia viacerých ligandov sa môže uskutočniť súčasne.
• Obsahuje činidlá pre dve individuálne redukčné reakcie.

Popis produktu

Číslo objednávky: RK-PA-1

Tabuľka 1. Informácie o obsahu a ukladaní

Materiál	Čiapka	Suma	Skladovanie
TCEP (500 mM)	Červená	2 x 20 ul	-20 °C
Zníženie vyrovnávacej pamäte [1]	Biela	2 x 1.8 ml	-20 °C
Čistiaca rotačná kolóna	Červená	4 x	2-8 °C
2.0 ml reakčné skúmavky na čistenie rotačnej kolóny		4 x	RT
Odstredivá filtračná jednotka (10 kDa MWCO)		2 x	RT
Odstreďovacia zberná trubica		4 x	RT

Len na výskumné použitie.

Tento produkt má obmedzenú trvanlivosť, pozrite si dátum exspirácie na štítku.

DÔLEŽITÉ

Produkty môžu byť odoslané pri rôznych teplotách, ale skladovanie by malo byť v súlade s pokynmi uvedenými v tabuľke. Suspenzia živice v čistiacej rotačnej kolóne obsahuje 0.02 % azidu sodného.

Vyžaduje sa ďalšie materiály

Tabuľka 2. Dodatočné materiály

Materiál	Komentáre
Stolná mikrocentrifúga	Požadovaný rozsah otáčok od 1,000 13,000 xg do XNUMX XNUMX xg
Vortex
1.5 ml reakčné skúmavky

Všetky potrebné roztoky a pufre sú súčasťou súpravy.

3-kroková redukcia biomolekuly v reakčnej skúmavke

Pred začatím si prečítajte celý protokol a vykonajte všetky kroky bez prerušenia.

TIP	Tento protokol sa môže uskutočniť súčasne pre viaceré kopulačné reakcie

Výmena tlmivého roztoku proteín/protilátka

1. Navlhčite membránu odstredivej filtračnej jednotky 100 µl redukčného pufra.
2. Pridajte cca. 200 µg (až 500 µg) proteínu/protilátky do filtračnej jednotky z kroku 1. V prípade potreby pridajte do filtra redukčný pufer, kým sa nedosiahne maximálny objem 450 µl a centrifugujte pri 13,000 14,000 xg (až 5 XNUMX xg) XNUMX min a zlikvidujte prietok.
3. Pridajte 350 µl redukčného pufra a centrifugujte pri 13,000 5 xg počas XNUMX minút a znova zlikvidujte prietok.
4. Opakujte krok 3 ešte raz s konečným časom odstreďovania 10 minút, aby ste získali konečný objem cca. 80 ul.
5. Zbierať sample buď pomocou 100 µL pipety do novej skúmavky, alebo umiestnením filtračného zariadenia hore dnom do novej odstredivej skúmavky, centrifugujte 2 minúty pri 1000 x g.

Zníženie pomocou TCEP

1. Pripravte 2.5 mM roztok TCEP v redukčnom pufri pridaním 1 ul 500 mM TCEP do 199 ul redukčného pufra.
   Pripravte vždy bezprostredne pred použitím.
2. Pridajte redukčný tlmivý roztok do samp98 fľaštičku na celkový objem 2 ul a pridajte 2.5 ul 50 mM roztoku TCEP, aby ste získali konečnú koncentráciu XNUMX uM TCEP. Reakciu premiešajte pipetovaním hore a dole.
3. Roztok sa inkubuje pri 37 °C pri 400 otáčkach za minútu počas 2 hodín, aby sa zabezpečila úplná redukcia.

Čistenie a koncentrácia

1. Uveďte do rovnováhy dve čistiace odstredivé kolóny (červený uzáver) na jedno vymytie TCEP:
   a. Odstráňte spodné tesnenie kolóny a uvoľnite uzáver (neodstraňujte uzáver).
   b. Kolóna sa umiestni do 2.0 ml reakčnej skúmavky.
   c. Odstreďujte pri 1,500 1 x g počas XNUMX minúty, aby ste odstránili skladovací roztok.
   d. Pridajte 400 µl redukčného pufra do živicového lôžka kolóny. Centrifugujte pri 1,500 1 x g počas XNUMX minúty, aby ste odstránili pufor.
   e. Opakujte krok d a výsledný pufor z reakčnej skúmavky odstráňte. Čistiaca rotačná kolóna by teraz mala byť v suchom stave.

TCEP umývanie

a. Kolóny z predchádzajúceho kroku vložte do nových 1.5 ml reakčných skúmaviek.
b. Odstráňte uzáver odstredivého stĺpca číslo 1 a jemne nalejte sample na vrch živicového lôžka.
c. Centrifugujte pri 1,500 xg počas 2 minút, aby ste získali sample (prietočné). Čistiacu rotačnú kolónu po použití zlikvidujte.
d. Odstráňte uzáver odstredivého stĺpca číslo 2 a nalejte sample z predchádzajúceho kroku do živicového lôžka.
e. Centrifugujte pri 1,500 xg počas 2 minút, aby ste získali sample (prietočné). Čistiacu rotačnú kolónu po použití zlikvidujte.
f. Tiolová spojka podľa užívateľskej príručky (HK-MAL-1 alebo HK-MAL-2) zníženej sample možno vykonať.

Ďalšie informácie

Výmena a koncentrácia pufra s odstredivými filtračnými jednotkami 

1. Vezmite jednu odstredivú filtračnú jednotku, pridajte príslušný objem pufra do filtračného zariadenia a uzavrite ho.
2. Umiestnite filtračné zariadenie s uzáverom do rotora odstredivky a zarovnajte pásik uzáveru smerom k stredu rotora; protiváhu s podobným zariadením.
3. Odstreďte zariadenie pri 13,000 14,000 xg (alebo XNUMX XNUMX xg) počas daného času.
4. Odstráňte prietok a zopakujte kroky 1-3.
5. Odstráňte zostavené zariadenie z centrifúgy a oddeľte filtračné zariadenie od skúmavky mikrocentrifúgy.
6. Ak chcete získať konjugát, umiestnite filtračné zariadenie hore dnom do čistej odstredivej skúmavky a zarovnajte otvorený uzáver smerom k stredu rotora; protiváhu s podobným zariadením. Odstreďovaním 2 minúty pri 1,000 XNUMX xg sa prenesie sample zo zariadenia do trubice.
   

Užitočné čísla objednávok

Tabuľka 3. Objednávacie čísla

Názov produktu	Suma	Objednávka č
spojovacia súprava heliX ® Thiol 1	5 x	HK-MAL-1
spojovacia súprava heliX ® Thiol 2	5 x	HK-MAL-2
Odstredivá filtračná jednotka (3 kDa MWCO)	5 ks.	CF-003-5
Odstredivá filtračná jednotka (10 kDa MWCO)	5 ks.	CF-010-5
10x vyrovnávacia pamäť A [2]	50 ml (výťažok 500 ml)	BU-P-150-10
5x vyrovnávacia pamäť B [3]	50 ml (výťažok 250 ml)	BU-P-1000-5

Kontaktovať

Dynamic Biosensors GmbH	Dynamic Biosensors, Inc
Perchtinger Str. 8/10	300 Trade Center, Suite 1400
81379 Mníchov	Woburn, MA 01801
Nemecko	USA

Informácie o objednávke order@dynamic-biosensors.com
Technická podpora support@dynamic-biosensors.com

1. Zníženie vyrovnávacej pamäte: 100 mM Na2HP4/NaH2P4, 300 mM NaCI, 5 mM EDTA, pH 7.4
2. Nárazník A: 50 mM Na2HP4/NaH2P4, 150 mM NaCl, pH 7.2
3. Buffer B: 50 mM Na2HP4/NaH2P4, 1 M NaCl, pH 7.2

ZÁKAZNÍCKA PODPORA

www.dynamic-biosensors.com
Nástroje a čipy sú navrhnuté a vyrobené v Nemecku.
©2024 Dynamic Biosensors GmbH | Dynamic Biosensors, Inc. Všetky práva vyhradené.

Dokumenty / zdroje

Dynamická súprava BIOSENSORS heliX plus Reduceing Agent Kit 1 [pdfPoužívateľská príručka RK-PA-1, heliX plus súprava redukčného činidla 1, heliX plus, súprava redukčného činidla 1, súprava činidla 1, súprava 1

Referencie

• Používateľská príručka