Testovacia súprava Olink Target 48

Krátke inštrukcie

Inkubácia

Pripravte inkubačný mix v mikrocentrifugačnej skúmavke podľa tabuľky nižšie.

Inkubačná zmes na ½ 96-jamkovej platne (μl)

• Inkubačný roztok Olink® 1-48 plex 168
• Olink® Target 48 Frw-sondy 21
• Olink® Target 48 Rev-sondy 21
• Celkom 210

1. Vortexujte a odstreďte inkubačný mix. Preneste 23 μl inkubačnej zmesi do každej jamky nového 8-jamkového stripu.
2. Preneste 3 μl inkubačnej zmesi do každej jamky prvých 6 stĺpcov 96-jamkovej platne reverzným pipetovaním a pomenujte platňu Inkubačná platňa.
3. Pridajte 1 μl každej sample pomocou viackanálovej pipety na dno jamky, 1 μl Sample Kontrola do troch horných jamiek (žltá), 1 μl negatívnej kontroly do dvoch jamiek (červená) a 1 μl kalibrátorov do troch jamiek (zelená) podľa usporiadania platne.
4. Platničku utesnite lepiacou plastovou fóliou, odstreďte pri 400 – 1000 xg, 1 minútu pri izbovej teplote. Inkubujte cez noc pri +4 °C.
5. Roztok PEA rozmrazte cez noc pri +4 °C a umiestnite zosilňovač PEA cez noc pri izbovej teplote.

Rozšírenie

Pripravte predlžovaciu zmes podľa nižšie uvedenej tabuľky.

Predlžovacia zmes na ½ 96-jamkovej platne (μl)

• Voda s vysokou čistotou (+4 °C) 4350
• Olink® 1-48 plex PEA Enhancer 580
• Olink® 1-48 plex PEA Solution 580
• Olink® 1-48 plex PEA Enzým 58
• Spolu 5 568

1. Inkubačná doštička sa nechá zohriať na izbovú teplotu, 400 minútu rotuje pri 1000 – 1 xg. Predhrejte stroj PCR.
2. Vortexujte zmes Extension a nalejte ju do viackanálového zásobníka pipety.
3. Spustite časovač na 5 minút a pomocou reverzného pipetovania preneste 96 μl predlžovacej zmesi do horných častí stien jamiek inkubačnej platne.
4. Platničku uzatvorte novou lepiacou plastovou fóliou, pomocou MixMate® platňu pretrepte pri 2000 otáčkach za minútu počas 30 sekúnd, pričom sa uistite, že sú všetky jamky premiešané, a odstreďte.
5. Vložte inkubačnú platňu do termocykléra a spustite program PEA. (50 °C 20 minút, 95 °C 5 minút (95 °C 30 sekúnd, 54 °C 1 minúta, 60 °C 1 minúta) x 17, udržiavanie pri 10 °C)

Detekcia

1. Pripravte a naplňte Olink® 48.48 IFC na expresiu proteínov. Stručne, vstreknite jednu injekčnú striekačku s kontrolnou hadičkou do každého akumulátora na čipe, odstráňte ochrannú fóliu zo spodnej časti IFC a potom naplňte IFC na Olink® Signature Q100 podľa pokynov na obrazovke prístroja.
2. Rozmrazte základnú dosku, premiešajte a krátko odstreďte.
3. Pripravte si detekčnú zmes podľa tabuľky nižšie.
   Detekčná zmes na ½ 96-jamkovej platne (μl)
   1. Olink® 1-48 plex Detection Solution 275.0
   2. Voda s vysokou čistotou 116.0
   3. Detekčný enzým Olink® 1-48 plex 3.9
   4. Olink® 1-48 plex PCR polymeráza 1.5
   5. Celkom 396.4
4. Detekčnú zmes vortexujte a krátko odstreďte a pridajte 46 μl zmesi do každej jamky 8-jamkového stripu.
5. Preneste 7.2 μl detekčnej zmesi do každej jamky stĺpca 1-6 v novej 96-jamkovej doštičke reverzným pipetovaním a pomenujte ju Sample Plate.
6. Vyberte inkubačnú platničku z termocykléra, odstreďte obsah a preneste 2.8 μl do Sample Platničku pomocou pipetovania dopredu.
7. Platničku utesnite lepiacou fóliou, pretrepte a otočte obe pri 400 – 1000 xg, 1 minútu pri izbovej teplote.
8. Preneste 5 μl z každej jamky stĺpca 1-6 doštičky s primerom a 5 μl z každej jamky stĺpca 1-6 na doštičke Sample Doska do naplneného 48.48 IFC ľavého a pravého vstupu. Použite spätné pipetovanie a vymeňte špičky po každom primeru alebo sample. Nenechávajte žiadne prívody prázdne.
9. Odstráňte bubliny a vložte IFC do Olink Signature Q100 a postupujte podľa pokynov na obrazovke prístroja.
10. Spustite IFC na Olink Signature Q100.

www.olink.com
© 2023 Olink Proteomics AB. Produkty a služby Olink sú určené len na výskumné účely a nie na použitie v diagnostických postupoch. Všetky informácie v tomto dokumente sa môžu zmeniť bez upozornenia. Tento dokument nie je určený na poskytovanie akýchkoľvek záruk, vyhlásení a/alebo odporúčaní akéhokoľvek druhu, pokiaľ takéto záruky, vyhlásenia a/alebo odporúčania nie sú výslovne uvedené. Olink nepreberá žiadnu zodpovednosť vyplývajúcu z konania potenciálneho čitateľa na základe tohto dokumentu. OLINK a logotyp Olink sú ochranné známky registrované alebo čakajúce na registráciu spoločnosťou Olink Proteomics AB. Všetky ochranné známky tretích strán sú majetkom ich príslušných vlastníkov. Produkty Olink a metódy testovania sú pokryté niekoľkými patentmi a patentovými prihláškami https://www.olink.com/patents/. Olink Proteomics, Dag Hammarskjölds väg 52B , SE-752 37 Uppsala, Švédsko 1126, v1.3, 2023-01-18

Dokumenty / zdroje

Testovacia súprava Olink Target 48 [pdfPokyny Target 48, testovacia súprava, Target 48 testovacia súprava

Referencie

• Používateľská príručka